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植物組培培養和組培技術(shù)

  植物組織培養是一項技術(shù)性強、無(wú)菌條件要求高的工作,在進(jìn)行植物組織培孬時(shí),要有必要的實(shí)驗設備條件和熟練的操作技術(shù)。

組培室儀器設備
  
  化學(xué)實(shí)植物組織培養和試管苗生產(chǎn)所使用的各種器具的洗談、干燥和保存,藥品的稱(chēng)量、溶解、配制,培養基的分裝、包扎和滅菌,植物材料的預處理,培養材料的觀(guān)察分析等操作都在化學(xué)實(shí)驗室中進(jìn)行;瘜W(xué)實(shí)驗室應有工作臺和存放化學(xué)助劑的藥品柜,以及放置常用玻璃器皿、試劑瓶等的器械櫥或玻璃柜。并放有烘箱、冰箱、天平、蒸餾水器、高壓滅菌鍋以及酸度計等。
  
  培養容器的洗滌和培養基的滅菌,若無(wú)滅菌室和洗滌室也可在化學(xué)實(shí)驗室中進(jìn)行,但應在房間的一角,遠離天平和冰箱,而且在墻壁上設置換氣窗,以利通風(fēng)排氣,氣窗的周?chē)媚蜐癫牧辖ㄔ。如當地水質(zhì)不良,還應添置一臺玻璃蒸餾水器或金屬蒸餾水器,以制取蒸餾水。
  
  接種室植物材料的接種、培養物的轉移、試管苗的繼代等,均需在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行,無(wú)菌條件的好壞、持續時(shí)間的長(cháng)短,對減輕培養物的污染、提高工作效率關(guān)系很大。
  
  無(wú)操作室供外植體的接種、培養物的轉移和原生質(zhì)體的游離培養操作之用。要求用紫外光燈火菌;鹁竽荛L(cháng)時(shí)間保持無(wú)菌狀態(tài),以利無(wú)菌操作。無(wú)菌室地而要平坦,墻壁要光滑,采用耐水、耐藥的材料裝修,避免消毒腐蝕。除出人口和通風(fēng)囗外,均應密封并安裝滑門(mén),以減少與外界空氣的對流·防止外界帶菌塵埃的侵人。室內應盡量少放設備和器械,室內上方和門(mén)口應安裝紫外線(xiàn)燈,用于空氣及表面消毒。另外,要定期用甲醛和高錳酸鉀熏蒸用70%的酒精或0巧%笨酚噴霧降塵和消毒。使用前先用2%新潔爾滅擦洗,然后開(kāi)紫外線(xiàn)燈照射20分鐘以上。無(wú)菌室外應有準備室,供操作人員更換工作服、工作帽和拖鞋之用,以防止帶人病菌,以保證無(wú)菌室能長(cháng)時(shí)間和大量進(jìn)行無(wú)菌操作。
  
組培室儀器設備
 
  接種箱接種箱大小為長(cháng)80一120厘米,寬40一厘米,高50、厘米,接種箱上面、前面及兩側均裝有玻璃,前面出人口外裝有布質(zhì)袖罩。接種箱內裝有紫外線(xiàn)燈,以利經(jīng)常消毒,也可用有機玻璃制作接種箱。如無(wú)無(wú)菌室,可用接種箱代替,但必須安放在干凈、光線(xiàn)好的室內。
  
  超凈工作臺超凈工作臺是目前植物組織培養上最常用的、最普及的無(wú)菌操作裝置,與接種箱和無(wú)菌室相比,超凈工作臺既方便又舒適,無(wú)菌效果又好。它有單人、雙人及3人式的,也有開(kāi)放和密封式的。超凈工作臺一般較寬,購置和設計房屋時(shí)注意'以防門(mén)太窄而搬不進(jìn)去。超凈工作臺主要是通過(guò)風(fēng)機,這人的空氣經(jīng)過(guò)細菌過(guò)濾裝置,再流過(guò)工作臺。因此,超凈工作臺應放置在空氣干凈、地面無(wú)灰塵的地方,以延長(cháng)使用期。使用過(guò)久,引起堵塞,需要清洗和更換過(guò)濾器。
  
  培養室培養室是人工條件下培養接種物及試管苗的場(chǎng)所?煞譃槠胀ㄅ囵B室。照明設備和控溫設備。一般要求溫度在25±2℃之間,用控溫儀
  
  下保證室內的溫度恒定在規定的范圍之內。為了便于檢查溫度、濕度的變化情況,要放置自動(dòng)記錄溫度、濕度計。培養室的光源,一般采用白色熒光燈,光源通常置于培養物的上方或側面。有些培養室還設有暗室,以進(jìn)行晴培養獲得黃化苗等。在培養室里,還要放置培養裝置,最常見(jiàn)的是固體培養所需要的培養架。若要進(jìn)行液體懸浮培養,還需要有搖床、轉床等。節能培養室其特點(diǎn)是將配制培養基、接種、培養等步驟連貫在一起。其中實(shí)驗室主要用來(lái)配制培養基,天平室除稱(chēng)量藥品外,也可放置顯微鏡進(jìn)行細胞學(xué)觀(guān)察;滅菌室用以進(jìn)行高壓滅菌。培養室窗戶(hù)要大,使光照充足,最好用雙層玻璃,以利隔熱和防塵。如果在樓房中設計組織培養室,則實(shí)驗室、天平室、滅菌室可以放在中間樓道的兩邊,接種室和培養室在樓房的一端,不要中間走廊。
  
組培室儀器設備
 
  夏天溫度可穩定周期25一3℃,在朝北面的培養室內“,也適合試管苗的生“要。冬天可在中間的“室“。二是節約開(kāi)支。節能培養室可充分利用自然光能,開(kāi)支就大大節省了。在冬季,南北的培養室可以作為試管苗的冷藏室,在春、夏、秋三季,中間的培養室可以作為暗培養室進(jìn)行愈傷組織等的培養,或者作為培養無(wú)病毒植株的熱處理培養室,進(jìn)一步提高節能培養室的效益。三是試管苗的素質(zhì)好。利用自然光培養出的試管苗,葉色綠,生長(cháng)茁壯,比人工照光培養的要好。
  
  洗滌室植物組織培養對培養用具不僅要求質(zhì)地好,而且對其清潔工作要求較嚴格,以防止一些有毒的或其他有害化學(xué)物質(zhì)(如重金屬離子、酸堿等)對培養物的不利影響。因此,個(gè)有一定規模的組織培養室,必須有專(zhuān)用的洗滌室,專(zhuān)門(mén)供輔助人員工作和貯藏洗凈的培養瓶。洗滌室應設置大的二聯(lián)洗滌池、工作臺架、玻璃瓶晾干架、放培養瓶的架子和箱子、大型烘箱,還應有水箱、各種刷子等。洗滌室裝有水槽用于用具的清洗,地面要耐濕并能排水。滅菌鍋、蒸餾水器、干燥箱等可從化學(xué)實(shí)驗室移人洗滌室,以方便操作。為節省房屋,器皿的清洗工作也可在走道上進(jìn)行。
組培室儀器設備
  
  細胞學(xué)觀(guān)察室在植物細胞和組織培養過(guò)程中,隨時(shí)觀(guān)察和記錄其細胞學(xué)和形態(tài)解剖學(xué)的變化,故要進(jìn)行顯微觀(guān)察、顯微和攝影、組織切片、細胞染色等工作。因此,細胞學(xué)實(shí)驗室應由3個(gè)小間組成,即進(jìn)行一般操作間(切片、染色和材料準備等)、顯微鏡觀(guān)察間和暗室。6,貯藏室有一間貯藏室更好。把暫時(shí)不用的器皿、用具等存放在貯藏室內,也可以用作種質(zhì)保存。
組培室設備
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