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植物組培培養形態(tài)發(fā)生潛力的喪失

  有些愈傷組織或懸浮培養物起初具有器官和(或)胚胎發(fā)生潛力,但經(jīng)過(guò)反復繼代保存之后,這種形態(tài)發(fā)生能力常常逐漸下降,有時(shí)甚至完全喪失。為了解釋這種現象,現在有三種假說(shuō)。

植物培養室基本原理
  
  1.遺傳說(shuō)
  
  按照這個(gè)假說(shuō),長(cháng)期培養物器官發(fā)生或胚胎發(fā)生能力下降的原因,是由于在培養細胞中常見(jiàn)的核的變化,它們包括多倍性、非整倍性和染色體突變等。這種由遺傳原因造成的形態(tài)發(fā)生潛力的喪失是不可逆的。
  
  2.生理說(shuō)
  
  證據表明,至少在某些情況下,形態(tài)發(fā)生潛力的下降可能是由于細胞或組織內激素平衡關(guān)系的改變造成的,或是由于細胞對外源生長(cháng)物質(zhì)敏感性的改變造成的。在這種情況下,細胞雖然停止了器官和胚胎的分化,但不一定就喪失了這種分化能力。因而,在這種情況下,如果改變外部處理條件,應該有可能使細胞的這種內在潛力得到恢復。在有些組織中,通過(guò)冷處理或改變培養基成分,確已實(shí)現了這種可能性。
  
  如前所述,在胡蘿卜懸浮培養中,胚性細胞團在含有生長(cháng)素的培養基中進(jìn)行增殖,在不含生長(cháng)素的培養基中發(fā)育胚胎,Fridborg和Eriksson(1975)看到,在含有2,4-D的培養基中培養8周之后,本來(lái)具有全能性的胡蘿卜培養物完全停止了胚胎發(fā)生過(guò)程,然而,若在這種含有生長(cháng)素的培養基中加人1%、4%的活性炭,喪失了的全能性又可以得到恢復。以上事實(shí)充分說(shuō)明,在這個(gè)培養系統中,胚性潛力的喪失可能是由于內源生長(cháng)素水平提高所致。胡蘿卜的馴化愈傷組織的生長(cháng)并不需要外源生長(cháng)素。在第4.4.1節中所介紹的有關(guān)甜橙的例子同樣表明,在長(cháng)期培養的細胞中,內源生長(cháng)素水平的提高與胚性潛力的喪失是密切相關(guān)的。

組培室設計方案
  
  3.競爭說(shuō)
  
  這個(gè)假說(shuō)本質(zhì)上是前兩個(gè)假說(shuō)的結合。按照這個(gè)假說(shuō)的倡議者Smith和Street(1974)的看法,在胡蘿卜細胞長(cháng)期連續繼代培養期間,有兩個(gè)過(guò)程可能與胚胎發(fā)生能力的下降以致最終的喪失有關(guān)。首先,細胞對于生長(cháng)素(2,4一D)抑制全能性表達的作用變得比較敏感;其次,隨著(zhù)時(shí)間的推移,由于培養細胞在細胞學(xué)上的不穩定性,出現了缺乏胚性潛力的新的細胞系。這些細胞學(xué)上的變化不一定是染色體數目的變化,而可能只是遺傳信息的小的突變、丟失或易位。實(shí)際上,J。nes(1974)已經(jīng)證實(shí),在胡蘿卜培養物中,細胞群體在成胚能力上的不穩定性,可能是由用于建立該培養物的組織帶來(lái)的。在復雜的多細胞外植體中,只有少數細胞能夠產(chǎn)生胚性細胞團,其余細胞都是非全能性的。按照這種競爭說(shuō),如果非胚性的細胞類(lèi)型在所用的培養基中具有生長(cháng)上的選擇優(yōu)勢,在反復的繼代培養中,非胚性細胞的群體將會(huì )逐步增加,而胚性成分則逐漸減少。到了一定時(shí)期之后,培養物中已不再含有任何胚性細胞,這時(shí)若想再恢復它們的胚胎發(fā)生能力就不可能了。然而,如果在培養物中存在少量胚性細胞,只是由于處在支配地位的非胚性細胞的抑制作用,這些胚性細胞的全能性無(wú)法表達,在這種情況下,通過(guò)改變培養基成分,使之有選擇地促進(jìn)全能細胞的增殖,就應當有可能恢復該培養物的形態(tài)發(fā)生潛力。

組培室設計方案
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